Kit de testes rápidos de segurança alimentar com tubos de PCR pré-dispensados para detecção conveniente e rápida de cronobactérias em produtos alimentares

LyoDt® Reagente de detecção de PCR em tempo real para Cronobacter em pó liofilizado

1.Introdução

Cronobacteré um gênero de bactérias recentemente definido, cujo antecessor éEnterobacter sakazakii. Cronobacteré um patógeno grave transmitido por alimentos, transmitido principalmente através de fórmulas infantis contaminadas, causando meningite neonatal, sepse e enterocolite necrotizante.

Este produto é um reagente de PCR em tempo real liofilizado para a detecção deCronobacterUtiliza o gene ompA altamente conservado deCronobacterÉ um mastermix que contém todos os ingredientes necessários, com excepção do ADN modelo, e é pré-dispensado como um único teste em tubos de PCR para facilitar a utilização.Este produto não requer cadeia de frio para transporte e armazenamento, o que reduz significativamente os custos de transporte e elimina eventuais perdas por desperdício de reagente e contaminação por aerossóis.

2. Especificações e composição

3. armazenamento Duração de validade

Armazenar à temperatura ambiente (5-30°C). É estável por até 12 meses. Uma vez aberta a embalagem a vácuo, conserve os produtos não utilizados no saco de plástico recolocável fornecido com os dessecantes,e no saco de alumínio.

ATENÇÃO:

A diminuição da dimensão do grão de reagente indica a entrada de umidade no tubo e a umedecimento do reagente.Todos os reagentes com uma granulação significativamente menor do que o habitual devem ser descartados ou testados com controlo positivo antes da utilização.para ensaios de amostras.

4- EQUIPAMENTOS e reagentes adicionais necessários

1) Instrumento de PCR em tempo real

2) Pipetas e pontas

3) Água sem nuclease

4) Kit de extracção de ácido nucleico

5. SISTEMAS de PCR em tempo real compatíveis

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6Espécimes aceitáveis

Caldo de enriquecimento de alimentos, vomitos, amostras de diarreia, etc.

7. PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO

1) Extração de ácido nucleico

Extrair ADN de amostras usando um kit de extracção adequado.Recomenda- se que oDNAé elutado com cerca de 100 μl de tampão de elução(TEouH livre de nuclease₂O) na fase final daextração.O ácido nucleico purificado deve ser utilizado imediatamente ou armazenado a - 20°C.

2) Preparação do controlo positivo

O controlo positivo pode ser armazenado à temperatura ambiente antes da reidratação durante um máximo de 12 meses.₂O, em vórtice a baixa velocidade durante 15 a 20 segundos e centrifugado a baixa velocidade durante 15 a 20 segundos.

3) Preparação de misturas de PCR em tempo real

A) Abrir a embalagem a vácuo e retirar as tiras de 8 tubos que contêm o reagente.Se os tubos fornecidos não forem compatíveis com o seu instrumento, transfira o reagente para um tubo óptico compatível com o seu instrumento.

B) Abrir os tubos e descartar as tampas (não adequadas para máquinas de PCR em tempo real) e preparar a mistura de reação no gelo como abaixo.

fase deextração.O ácido nucleico purificado deve ser utilizado imediatamente ou armazenado a - 20°C.

2) Preparação do controlo positivo

O controlo positivo pode ser armazenado à temperatura ambiente antes da reidratação durante um máximo de 12 meses.₂O, em vórtice a baixa velocidade durante 15 a 20 segundos e centrifugado a baixa velocidade durante 15 a 20 segundos.

3) Preparação de misturas de PCR em tempo real

A) Abrir a embalagem a vácuo e retirar as tiras de 8 tubos que contêm o reagente.Se os tubos fornecidos não forem compatíveis com o seu instrumento, transfira o reagente para um tubo óptico compatível com o seu instrumento.

B) Abrir os tubos e descartar as tampas (não adequadas para máquinas de PCR em tempo real) e preparar a mistura de reação no gelo como abaixo.

* Pode ser utilizada água sem nuclease como controlo negativo.

• A PCR deve ser revestida com tampas (fias) adequadas para a PCR em tempo real (não fornecida).

D) Vortex os tubos a baixa velocidade durante 10 ~ 15sec, e centrifugar a 3000rpm durante 20sec e colocá-los em um instrumento de PCR em tempo real.

2) Configuração RT-PCR

Configure o volume de reação em 25μl e o procedimento de amplificação por PCR como se segue.

3) Análise e interpretação dos resultados