Kit de ensaio rápido de segurança alimentar para Escherichia coli enterohemorrágica EHEC Detecção com reagente PCR em tempo real liofilizado Não é necessária cadeia de frio

1.Descrição

Escherichia coli enterohemorrágica(EHEC) é um grupo deE. coliEstirpes capazes de causar diarreia hemorrágica e enterite no homem, sendo o sorotipo O157:H7 a estirpe mais representativa.Leite cru, aves de capoeira e seus produtos, bem como frutas e vegetais, sendo a carne bovina o principal veículo de transmissão.

Este produto é um reagente de PCR em tempo real liofilizadopara o detecção deEscherichia coliO157:H7. Ele usa o altamente conservado rfbE género deEscherichia coliO157:H7 como alvo de detecção. Trata-se de um mastermix que contém todos os ingredientes necessários, exceto o ADN modelo, e é pré-dispensado como um único teste em tubos de PCR para facilitar o uso.Este produto não requer cadeia de frio para transporte e armazenamento, o que reduz significativamente os custos de transporte e elimina eventuais perdas por desperdício de reagente e contaminação por aerossóis.

2. Especificações e composição

3. armazenamento Duração de validade

Armazenamentoà temperatura ambiente (5 a 30)°C). É estável por até 12 meses. Uma vez aberta a embalagem a vácuo, conserve os produtos não utilizados no saco plástico recolocável fornecido com os dessecantes,eno saco de alumínio. 

ATENÇÃO: 

A diminuição da dimensão do grão de reagente indica a entrada de umidade no tubo e a umedecimento do reagente.Todos os reagentes com uma granulação significativamente menor do que o habitual devem ser descartados ou testados com controlo positivo antes da utilização. para ensaios de amostras.

4- EQUIPAMENTOS e reagentes adicionais necessários

1)Instrumento de PCR em tempo real

2)Pip- Não.e gorjetas

3)Nuclease-água livre

4)Kit de extracção de ácido nucleico

5. SISTEMAS de PCR em tempo real compatíveis

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6Espécimes aceitáveis

Caldo de enriquecimento de alimentos, vomitos, amostras de diarreia, etc.

7. PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO

1)NuclearACIDEextração

ExtractoDNAde amostras com um kit de extracção adequado.Recomenda- se que oDNAé elutado com cerca de 100 μl de tampão de elução(TE ouH livre de nuclease₂O)na fase final deextração.O ácido nucleico purificado deve ser utilizado imediatamente ou armazenado a - 20°C.

2)Preparação do controlo positivo

O controlo positivo pode ser armazenado à temperatura ambiente antes da reidratação até 12 meses.É.deve ser reidratado antes da utilizaçãoadicionando250μlde amortecimento TE ou nsem escleroseH₂O,utilizar imediatamente ou conservarem -20°C.

3)PCR em tempo realMIXPreparação

A) Abrir a embalagem a vácuo e retirar a fita de 8 tubossVerifique se o pellete está no fundo do tubo. (Cortar o número de tubos conforme necessário senecessária)Se os tubos fornecidos não forem compatíveis com o seu instrumento, transfira o reagente para um tubo óptico compatível com o seu instrumento.

B) Abrir os tubos e descartar as tampas (não adequadas para máquinas de PCR em tempo real) e preparar a mistura de reação no gelo como se segue.

* Pode ser utilizada água sem nuclease como controlo negativo.

C)A PCR deve ser revestida com tampas (listas) adequadas para a PCR em tempo real.(não fornecido).

D) Vortex os tubos a baixa velocidade durante 10 ~ 15sec, e centrifugar a 3000rpm durante 20sec e colocá-los em um instrumento de PCR em tempo real.

4)Configuração RT-PCR

Defina o volume de reação em 25μl e o procedimento de amplificação por PCR como se segue. fluorescência a 60°C, e selecionar NÃO como referência passiva.

5)ResultadoAanáliseeEu...Interpretação