Reagente de detecção de PCR em tempo real liofilizado para detecção de Listeria monocytogenes de alta sensibilidade sem necessidade de cadeia de frio

LyoDt^® Reagente de detecção de PCR em tempo real liofilizado para Testes

Manual de Uso1. DESCRIÇÃO

Listeria monocytogenes,

TestesEste produto é um reagente de PCR em tempo real liofilizado para a

detecção de Listeria monocytogenes .TestesC gene de  Listeria monocytogenes como alvo de detecção.Testes 2. ESPECIFICAÇÕES E COMPOSIÇÃO Cat No.

Descrição

Armazenar  à temperatura ambiente

(5-30°C )60°CB) Abra os tubos e descarte as tampas (não adequadas para máquinas de PCR em tempo real) e prepare a mistura de reação no gelo conforme abaixo.C Depois que a embalagem a vácuo for aberta, armazene os produtos não utilizados no saco plástico selável fornecido com os dessecantes, C  no saco de folha de alumínio.CUIDADO:A diminuição do pellet do reagente é uma indicação de que a umidade está entrando no tubo e o reagente está úmido. Quaisquer reagentes com tamanho de pellet significativamente menor do que o normal devem ser descartados ou testados com controle positivo antes do uso 

para teste de amostra 

.    4. EQUIPAMENTOS E REAGENTES ADICIONAIS NECESSÁRIOS1) 

Instrumento de PCR em tempo real

APip

O controle positivo pode ser armazenado à temperatura ambiente antes da reidratação e pontas3) Nuclease

Mágua livre4) Kit de extração de ácido nucleico

Defina o volume da reação como 25μl e o procedimento de amplificação da PCR conforme abaixo. Colete a fluorescência FAM a 60°C e selecione NENHUM como referência passiva.ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.

6. AMOSTRAS ACEITÁVEISC

7. PROCEDIMENTO DE OPERAÇÃO

1) 

Nucleico

Acido IxtraçãoExtrair DNA

 de amostras usando um kit de extração adequado. Recomenda-se que o DNA seja eluído com cerca de 100μl de tampão de eluição (TEse H sem nuclease 2O_{vortexado em baixa velocidade por 15-20 segundos e centrifugado em baixa velocidade por 15-20 segundos. Use imediatamente ou armazene} na etapa final de B) Abra os tubos e descarte as tampas (não adequadas para máquinas de PCR em tempo real) e prepare a mistura de reação no gelo conforme abaixo.. O ácido nucleico purificado deve ser usado imediatamente ou armazenado a -20°C. deve ser reidratado antes do uso Preparação do Controle Positivo

O controle positivo pode ser armazenado à temperatura ambiente antes da reidrataçãopor até 12 meses

.  Ele deve ser reidratado antes do uso adicionando 250 μl de tampão TE ou nuclease-free H2O, _{vortexado em baixa velocidade por 15-20 segundos e centrifugado em baixa velocidade por 15-20 segundos. Use imediatamente ou armazene} a -20°C.60°CC

Mistura PreparaçãoA) Abra a embalagem a vácuo e retire a tira de 8 tuboss

 contendo o reagente. Verifique se o pellet está no fundo do tubo(Corte o número de tubos conforme necessário se necessário ). Se os tubos fornecidos não forem compatíveis com o seu instrumento, transfira o pellet do reagente para um tubo óptico compatível com o seu instrumento.B) Abra os tubos e descarte as tampas (não adequadas para máquinas de PCR em tempo real) e prepare a mistura de reação no gelo conforme abaixo.Componente

Vol. /teste

Tampe a PCR usando tampas (tiras) adequadas para PCR em tempo real

(não fornecido).D) Vortexe os tubos em baixa velocidade por 10~15 segundos e centrifuge a 3000 rpm por 20 segundos e coloque-os em um instrumento de PCR em tempo real.4) 

Configuração de RT-PCR

Defina o volume da reação como 25μl e o procedimento de amplificação da PCR conforme abaixo. Colete a fluorescência FAM a 60°C e selecione NENHUM como referência passiva.Etapa

Temp. Tempo

nálise e Interpretação  ModeloCT